胡萝卜软腐果胶杆菌钼酸盐转运系统基因功能研究开题报告

 2023-02-10 16:11:33

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

研究概况与应用前景:

细菌性软腐病是世界性的重要细菌病害之一,在我国曾引发过多种园艺作物的严重经济损失。彩色马蹄莲(Zantedeschiasp.)是近年市场上重要的观赏花卉,由于其花色艳丽,花型独特,作为一高经济价值花卉在国际市场上所占的比例越来越大[1]。然而彩色马蹄莲的病害尤其是细菌性软腐病极大地限制其产业化的发展。胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacteriumcarotovorumsubsp.carotovorum,Pcc)是引起彩色马蹄莲细菌性软腐病的最主要病原菌[2]。Pcc属于变形菌门,肠杆菌科,软腐果胶杆菌属(Pectobacterium)的革兰氏阴性菌[3]。Pcc主要通过分泌各种植物细胞壁降解酶(PCWDEs)作为致病因子来侵染寄主植物,如:果胶酶,纤维素酶,蛋白酶等,其中,果胶酶被认为是Pcc最主要的致病因子[4,5]。

除了分泌一系列胞外酶摧毁寄主的防御系统以外,一些金属阳离子也被报道影响了Pcc的致病性,Forexample,calciuminfluencesexoenzymeproductioninP.例如当Pcc胞外钙离子浓度升高会抑制pehA基因的表达,从而毒力减弱[6];而当转运镁离子的corA基因突变后,Pcc的胞外酶活性也会降低,导致致病性减弱[7]。钼是细菌生生长中重要的微量元素之一,通常以钼酸盐的形式被吸收[8]。钼酸盐能够与喋呤结合形成钼酸盐辅助因子(Moco),是许多含Mo酶(如黄嘌呤氧化酶,亚硫酸盐氧化酶,醛氧化酶,亚硝酸盐还原酶等)的催化位点,影响着细菌的嘌呤代谢,固氮反应及植物的亚硫酸盐的解毒作用等许多重要的生理过程[9,10,11]。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标

(1)获得mod的敲除突变体;

(2)测定mod突变株的致病相关表型;

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3. 研究的方法与方案

研究方法

(1)利用两亲同源交换法对mod定向缺失敲除;

(2)测定突变体的致病相关表型如胞外果胶酶、纤维素酶和蛋白酶活力测定;

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4. 研究创新点

由于Pcc遗传信息多样,寄主范围广泛,致病因子复杂,目前该病害的防治仍旧以预防为主,还没有理想的防治方法。本研究通过对基因mod的功能研究,进一步探索mod基因出现差异表达的原因,及其致病相关性和功能的相关研究,为软腐果胶杆菌的致病机理和防治方法的研究提供一定的参考。

5. 研究计划与进展

研究计划:

2014年9月-10月:胡萝卜软腐果胶杆菌mod基因的定向敲除及互补菌株过表达菌株的构建;

2014年10月-11月:mod突变体致病性相关表型的测定;

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